【团体标准】 秀珍菇菌种工厂化生产技术规程

4基本条件技术人员、场地选择、厂房设置和布局、设备设施应符合NY/T528的规定。液体菌种应设独立培养间、空气净化系统、温控设施，配备液体菌种制作、培养、检验所需仪器设备。5种源宜选择经国家、省认定的品种；或选用种性明确、并经过两个以上生产周期试验、适合于设施栽培和工厂化栽培的品种。6固体菌种母种6.1.1容器宜使用18mm×180mm或20mm×200mm玻璃试管。6.1.2培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL。6.1.3配置灭菌马铃薯煮汁过滤后，加入剩余试剂，加水至1000mL，加热至琼脂融化并搅拌均匀，分装试管，培养基分装量为试管容量1/5～1/4，121℃灭菌30min。6.1.4冷却灭菌结束后温度降至65℃±5℃时，在洁净的环境中摆斜面，斜面长度不超过试管长度的2/3。斜面凝固后，按NY/T528的规定进行试管灭菌效果检验。6.1.5接种培养按NY/T528的规定执行，做好标记。接种后试管置于23℃～25℃下避光培养，待菌丝长满斜面2/3以上备用。原种6.2.1容器符合NY/T528的规定，塑料制品符合GB4806.7的规定。6.2.2培养料推荐配方：a)棉籽壳60%、杂木屑20%、麸皮18%、石灰1%、石膏1%，培养基含水量60%～63%；b)杂木屑45%、玉米芯35%、麸皮18%、石膏1%、石灰1%，培养基含水量60%～63%。6.2.3配制灭菌按NY/T528的规定配制后分装入原种瓶（袋），121℃～123℃灭菌2h。6.2.4冷却接种料温冷却至25℃以下，按NY/T528的规定接种，做好标记。6.2.5培养接种后置于培养室，23℃～25℃遮光培养，空气相对湿度保持在55%～65%，二氧化碳浓度低于0.5%，当菌丝长满瓶（袋）时结束培养，培养全过程应少于30d。培养期间按NY/T528要求定期检查。6.2.6质量检验培养完成后对菌种进行质量检验，检查要求应符合附录A的规定。栽培种6.3.1容器应符合NY/T528的规定。宜使用（17cm～18cm）×35cm×0.005cm规格的聚丙烯塑料袋，塑料制品符合GB4806.7的规定。6.3.2培养料推荐配方：a)棉籽壳30%、杂木屑50%、麸皮18%、石灰1%、石膏1%，含水量60%～63%；b)杂木屑45%、玉米芯35%、麸皮18%、石灰1%、石膏1%，培养基含水量60%～63%。6.3.3配制灭菌按NY/T528的规定配制后分装入菌种袋，121℃～123℃灭菌2.5h。6.3.4冷却接种灭菌结束后在冷却室冷却至25℃以下，接种按NY/T528的规定执行，每袋接种原种15g～20g。6.3.5培养培养要求见6.2.5，待菌丝长满菌袋。质量检验培养完成后对菌种进行质量检验，检验要求应符合附录A的规定。储藏完成培养后，菌种应在4℃冷库内储藏，时间不应超过30d。7液体菌种母种同6.1执行。摇瓶种7.2.1容器以1000mL的三角瓶为宜。7.2.2培养基马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、加水至1000mL。7.2.3配制灭菌马铃薯煮汁过滤后，加入试剂加水至1000mL搅拌均匀，装入摇瓶，装液量不超过摇瓶容量的1/5～2/5。装好的摇瓶放入高压灭菌锅内灭菌，121℃下灭菌30min。7.2.4接种培养培养基温度降至25℃以下，严格按照无菌操作程序，将母种块切割成3mm～5mm颗粒，接入待接种摇瓶培养基内，每100mL液体培养基接种10粒。接种后置于振荡培养箱，25℃下150rpm振荡培养5d～6d。7.2.5质量检验培养完成后对菌种进行质量检验，检验要求应符合附录B的规定。发酵罐菌种7.3.1容器根据生产规模选择相应发酵罐的容积，以1000L的规格为宜。7.3.2培养基参考配方：玉米粉2000g、蔗糖6000g、葡萄糖1000g、磷酸二氢钾500g、硫酸镁250g、水1000L，pH值自然。7.3.3配制灭菌原料搅拌均匀，不应有结块，转入发酵罐内，装液量不超过罐体容量的80%，加入0.03%消泡剂。121℃灭菌60min。生产用水应符合GB5749的规定。7.3.4接种培养培养基温度降至25℃以下，维持罐体压力在0.03MPa，快速接入摇瓶菌种。接种量为罐内培养基总体积的0.1%～0.2%。维持罐体压力在0.03MPa，温度25℃，搅拌状态下培养5d～7d（根据品种特性而定）。7.3.5质量检验培养完成后对菌种进行质量检验，检验要求应符合附录B的规定。8记录与留样各级菌种按NY/T528的规定建立生产记录并留样，档案保留2年以上