1性状取样品适量，于烧杯中，在自然光下观察其色泽。淄博维希尔生物技术有限公司和济南百鸣生物制药有限公司各生产了2批次，观察结果见表3。表2性状结果汇总表批数生产企业批号性状1淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS001红棕色粘稠液体2淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS002棕褐色粘稠液体3淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS003棕褐色粘稠液体4济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS001红棕色粘稠液体5济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS002红棕色粘稠液体6济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS003棕褐色粘稠液体经对6批次进行外观性状检查，确定该提取物的形状为：红棕色至棕褐色粘稠液体。2绿原酸鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂【鉴别】（1），清解合剂【鉴别】（1）项中取样量为10mL，相当于中间体兽药制剂用清解合剂提取物5g，取样量按5g±0.5g。其它按照清解合剂【鉴别】（1）检测。淄博维希尔生物技术有限公司生产了3批次；依照上述方法对3批产品的绿原酸进行鉴别，结果均显示在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图1，鉴别结果汇总表见表3。图1绿原酸鉴别结果汇总图（A-1、A-2、B-1、B-2、C-1、C-2,绿原酸对照品；A-3、A-4,批号WTBQJXS001；B-3、B-4，批号WTBQJXS002；C-3、C-4，批号WTBQJXS003）表3绿原酸鉴别结果汇总表批数生产企业批号鉴别结果1淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS001薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点2淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS002薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点3淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS003薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点由此确定取样量为5g±0.5g，其他按《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂【鉴别】（1）方法，适用于兽药制剂用清解合剂提取物的绿原酸的鉴别。3栀子苷鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂【鉴别】（2），清解合剂【鉴别】（2）项中取样量为10mL，相当于中间体兽药制剂用清解合剂提取物5g，取样量按5g±0.5g。其它按照清解合剂【鉴别】（2）检测。淄博维希尔生物技术有限公司生产了3批次；依照上述方法对3批产品的栀子苷进行鉴别，均显示在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，结果见图2，鉴别结果汇总表见表4。图2栀子苷鉴别结果汇总图（A-1、A-2、B-1、B-2、C-1、C-2,栀子苷对照品；A-3、A-4,批号WTBQJXS001；B-3、B-4，批号WTBQJXS002；C-3、C-4，批号WTBQJXS003）表4栀子苷鉴别结果汇总表批数生产企业批号鉴别结果1淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS001薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点2淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS002薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点3淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS003薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点由此确定取样量按5g±0.5g，其他按《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂【鉴别】（2）方法，适用于兽药制剂用清解合剂提取物的栀子苷的鉴别。4相对密度按照《中华人民共和国兽药典》二部附录的规定检测。淄博维希尔生物技术有限公司和济南百鸣生物制药有限公司各生产了3批次，结果见表5。表5相对密度结果汇总表批数生产企业批号相对密度平均值RSD%（n=4）1淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0011.181.191.180.691.181.172淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0021.191.201.200.801.211.193淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0031.201.211.210.671.221.214济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0011.191.201.200.681.201.215济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0021.201.201.190.971.181.186济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0031.201.201.210.791.221.21RSD%（n=24）1.116批次的相对密度范围在1.18~1.21之间，批内相对标准偏差＜1%，批间相对标准偏差＜2%；考虑实验间的检测误差，且相对密度浓缩到1.25以上时，流动性差，难以从浓缩罐中转移，因此确定相对密度技术指标范围为1.15~1.25。5pH按照《中华人民共和国兽药典》二部附录的规定对pH进行检测。淄博维希尔生物技术有限公司和济南百鸣生物制药有限公司各生产了3批次，结果见表6。表6pH结果汇总表批数生产企业批号pH平均值RSD%（n=4）1淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0015.55.45.51.485.65.52淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0025.35.45.41.785.55.33淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0035.55.55.51.765.45.34济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0015.55.65.61.465.65.75济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0025.55.55.50.915.55.46济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0035.45.55.51.485.55.6RSD%（n=24）1.866批次的检验结果pH范围在5.4~5.6之间，批内相对标准偏差＜2%，批间相对标准偏差＜2%；考虑不同的生产企业，和实验室间的检验误差，确定产品pH技术指标范围为4.5~6.5。6黄芩苷含量按照《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂【含量测定】，清解合剂【含量测定】中取样量为2mL，置100mL量瓶中，相当于中间体兽药制剂用清解合剂提取物1g置50mL量瓶中，确定兽药制剂用清解合剂提取取样量为1g，置50mL量瓶中。其它按照清解合剂【含量测定】检测。经淄博维希尔生物技术有限公司和济南百鸣生物制药有限公司各生产了3批次，检验结果见表7。表7黄芩苷含量结果汇总表批数生产企业批号黄芩苷含量（mg/g）平均值RSD%（n=4）1淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0012.372.392.360.882.342.362淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0022.332.302.320.792.342.313淄博维希尔生物技术有限公司WTBQJXS0032.332.342.330.352.322.334济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0012.332.372.361.092.352.395济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0022.362.402.380.722.372.38表7（续）6济南百鸣生物制药有限公司BTBQJXS0032.332.312.310.612.302.30RSD%（n=24）1.296批次检验结果每1g提取物中含黄芩按黄芩苷(C21H18O11)计均＞2.3mg，批内相对标准偏差＜2%，批间相对标准偏差＜2%；考虑不同的生产企业和实验室间的误差，确定该产品黄芩苷含量1g提取物中含黄芩按黄芩苷(C21H18O11)计，≥2.2mg。7黄芩苷含量方法验证本标准黄芩苷含量方法参照并引用了《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂。因此参照《中华人民共和国兽药典》二部附录中兽药质量标准分析方法验证指导原则进行分析方法验证，证实此方法适用兽药制剂用清解合剂提取物的相应检测要求。7.1准确度在规定范围内，分别制备3份不同浓度的黄芩苷供试品溶液进行测定，高、中、低浓度对照品加入量与所取供试品中待测成分里量之比控制在1.2:1、1:1、0.8:1，每种浓度分别制备3份，用9份样品的测定结果进行评价。检测结果见表8。表8清解合剂提取物准确度实验结果准确度供试溶液本底值（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）RSD（%）80%（0.576mg/mL）10.620.4961.11599.80.820.620.4961.11299.230.620.4961.11499.6100%（0.720mg/mL）10.620.6621.28099.720.620.6621.27899.430.620.6621.27498.8120%（0.864mg/mL）10.620.7441.35598.820.620.7441.36299.730.620.7441.36099.5平均回收率99.6%，回收率RSD＜2%，证明此方法准确度良好。7.2精密度7.2.1重复性在规定的测试条件下，同一份均匀供试品，经同一分析人员使用同一分析，设备6次取样测定所得结果见表9。表9清解合剂提取物重复性实验结果样品123456含量mg/g1.2751.2791.2741.2761.2731.280平均含量mg/g1.28RSD%0.5由上表可见相对标准偏差RSD＜1.0%。无显著差异，证明方法重复性良好。7.2.2重现性在规定的测试条件下，同一供试样品在不同实验室由不同分析人员测定之间的精密度结果见表10。表10清解合剂提取物重现性实验结果样品123456含量mg/g1.2741.2801.2791.2741.2761.273平均含量mg/g1.27RSD%0.4相对标准偏差RSD＜1.0%。无显著差异，证明方法重现性良好。7.2.3专属性在规定的测试条件下，取溶剂、对照品溶液、供试品溶液分别进样检测，溶剂峰不干扰黄芩苷峰的检测，结果见表11。表11清解合剂提取物专属性实验结果溶液名称溶剂对照品溶液供试品溶液黄芩苷保留时间（min）——11.61211.114结果供试品溶液黄芩苷峰保留时间与对照品溶液黄芩苷峰保留时间一致，证明方法专属性良好。7.2.4线性与范围在规定范围内，分别制备5份不同浓度的黄芩苷对照品溶液进行测定，以测得的响应值对被测物的浓度进行作图，线性关系见表12。表12清解合剂提取物线性实验结果溶液名称浓度（μg/mL）峰面积1峰面积2峰面积平均值线性溶液116.01011.41012.61012.0线性溶液218.01122.51124.31123.4线性溶液320.01226.71227.71227.2线性溶液422.01330.41331.51331.0线性溶液524.01433.91432.81433.4线性方程y=50.955x+0.67相关系数R20.9994线性图由上表看出在测试浓度的80%~120%范围内，黄芩苷浓度与峰面积线性关系良好。8贮存和有效期8.1贮存本品处方与《中华人民共和国兽药典》二部清解合剂完全相同，参照兽药典膏剂冷藏规定确定该产品贮存条件为：冷藏贮存，不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混放。9.2有效期考虑不同的生产企业，其生产工艺及生产设备等有所不同，对产品的有效期的规定时间也不尽相同，所以规定有效期为：在符合运输、贮存条件的情况下，原包装产品的有效期与标签标识一致，即有效期由生产企业根据情况，自行确定。

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1性状取样品约2.0g，于表面皿中，在自然光下观察。累计观察山东金铸基药业有限公司公示生产样品3批次，结果见表2。表2黄栀提取物性状观察结果汇总表生产企业批号性状山东金铸基药业有限公司20231201棕黄色膏状体山东金铸基药业有限公司20231202棕黄色膏状体山东金铸基药业有限公司20231203棕褐色膏状体根据观察结果确定产品性状为：棕黄色至棕褐色膏状体。2黄连鉴别按照《兽药质量标准》（2017版）中药卷黄栀口服液【鉴别】（1），黄栀口服液【鉴别】（1）项中取样量为10mL，相当于中间产品黄栀提取物5g，确定取样量为5（±0.5）g。按标准中给出的方法：置水浴上蒸至近干，加甲醇20mL，加热回流15分钟，滤过，滤液水浴上蒸干，残渣加乙醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.5g，加甲醇10mL，加热回流15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。对山东金铸基药业有限公司生产的3批产品进行了薄层色谱鉴别，结果见图1。图1黄连薄层鉴别根据检测薄层色谱图，确定该方法适用于该产品黄连鉴别。3黄芩鉴别按照《兽药质量标准》（2017版）中药卷黄栀口服液【鉴别】（2），黄栀口服液【鉴别】（2）项中取样量为10mL，相当于中间产品黄栀提取物5g，确定取样量为5（±0.5）g。。按标准中给出的方法：置水浴上蒸至近干，残渣加甲醇20mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一以含4%醋酸钠的甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显一相同的暗绿色斑点。对山东金铸基药业有限公司生产的3批产品进行了薄层色谱鉴别，结果见图2。图2黄芩薄层鉴别根据检测薄层色谱图，确定该方法适用于该产品黄芩鉴别。4栀子苷鉴别按照《兽药质量标准》（2017）二部黄栀口服液【鉴别】（3），黄栀口服液【鉴别】（3）项中取样量为10mL，相当于中间产品黄栀提取物5g，确定黄栀提取物取样量为5（±0.5）g。按标准中给出的方法：置水浴上蒸至近干，加丙酮20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液挥至2mL，作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加丙酮制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述两种溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5:5:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。对山东金铸基药业有限公司生产的3批产品进行了薄层色谱鉴别，结果见图3。图3栀子苷薄层鉴别根据检测薄层色谱图，确定该方法适用于该产品栀子苷的鉴别。5相对密度按照《中华人民共和国兽药典》二部附录0601相对密度测定法（比重瓶法）中的规定执行。具体数据见下方表3，结果检测数据均在此范围。表3黄栀提取物相对密度结果汇总表批号相对密度平均值RSD（%）202312011.171.181.171.170.891.151.161.17202312021.181.191.171.190.891.181.201.19202312031.191.211.191.200.971.201.201.22批间均一性（x?）1.181.51（n=18）三批样品相对密度的平均值为1.18。试验结果表明，批内均一性、批间均一性均符合要求，说明本品工艺稳定。我们在浓缩过程中发现相对密度浓缩到1.25以上时，流动性差，难以从浓缩罐中转移，因此控制到1.15~1.23，易于转移、调制配方，最终确定黄栀提取物的相对密度为1.15~1.23。6pH值按照《中华人民共和国兽药典》二部附录0631pH值测定法中的规定执行。具体数据见下方表4，结果检测数据均在此范围。表4黄栀提取物pH值结果汇总表批号pH值平均值RSD（%）202312014.714.754.774.791.244.844.814.87表4（续）202312024.894.924.854.890.854.964.874.86202312035.015.004.984.980.724.994.914.97批间均一性（x?）4.891.83（n=18）根据三批平行样结果的平均值为4.89，结合最终黄栀口服液的pH值范围，同时考虑不同企业工艺略有差异和实验室间的检测误差，最终确定黄栀提取物的pH值应为3.5~5.5。7盐酸小檗碱含量测定按照《兽药质量标准》（2017版）中药卷黄栀口服液并无含量测定，为保证产品质量，因此对君药的黄连进行含量控制。我们对《中华人民共和国兽药典》以及《兽药质量标准》2017版中涉及黄连含量检测的液相方法进行汇总和实验，最终确定一个适合的液相含量测定方法。方法如下：按照《中华人民共和国兽药典》二部黄连【含量测定】，黄连【含量测定】中取样量为0.2g，相当于中间产品黄栀提取物2.5g，确定黄栀提取物取样量为2.5g。称取规定重量的黄栀提取物，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，加热回流15分钟，滤过，滤液水浴蒸干，用甲醇定容至10mL。精密量取续滤液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。因此为保证产品质量，我们进行了多批实验室小试验证，最终确定含量每1g含黄连以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，含小檗碱（C20H17NO4）≥2.00mg，实验结果见表5.。表5黄栀提取物盐酸小檗碱含量测定结果汇总表批号盐酸小檗碱（mg/g）平均值RSD（%）202312012.482.442.502.451.312.442.452.41202312022.462.512.462.481.302.532.472.45202312032.532.562.592.531.672.482.512.49批间均一性（x?）2.491.84（n=18）三批样品中盐酸小檗碱的含量平均值为2.49mg/g。实验结果表明，批内均一性、批间均一性均符合要求，证明本品工艺稳定。考虑到实验室间检测误差、工艺条件等因素，含量标准在平均值的基础上下调至80%左右，定为盐酸小檗碱含量不得少于2.00mg/g。为了保证试验方法适合于黄栀提取物的检测，我们进行了分析方法验证：本标准试验方法参照并引用了《中华人民共和国兽药典》2022版中黄连药材的含量测定方法。因此参照《中华人民共和国兽药典》一部附录9101兽药质量标准分析方法验证指导原则进行分析方法验证，证实此方法适用兽药制剂用黄栀提取物的相应检测要求。7.1.准确度在规定范围内，取同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品，向已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率，用6份样品的测定结果进行评价。实验结果见表6，回收率,在90%~108%之间。表6黄栀提取物准确度实验结果序号已知含量（mg）测得量加标量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（mg）（%）11.092.1821.102100.4699.680.4921.092.1931.10299.9531.092.2081.10299.2841.092.2021.10299.5551.092.2121.10299.1061.092.1971.10299.77本实验方法回收率RSD为0.49%，小于2%，因此本方法可对盐酸小檗碱含量进行准确测定。7.2.精密度7.2.1.重复性在规定的测试条件下，同一份均匀供试品，经同一分析人员使用同一分析设备6次取样测定所得结果之间的相对标准偏差（RSD）不得过1.0%，实验结果见表7。表7黄栀提取物重复性实验结果样品123456含量，mg/g2.4882.4972.5172.4882.5172.487平均含量，mg/g2.50RSD，%0.58实验结果表明，重复性结果RSD为0.58%，小于1.0%，无显著差异，方法重复性良好。7.2.2.重现性在规定的测试条件下，同一供试样品在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，相对标准偏差（RSD）不得过1.0%，实验结果见表8。表8黄栀提取物重现性实验结果样品123456含量，mg/g2.4872.4912.5372.4782.5202.496平均含量，mg/g2.50RSD，%0.89实验结果表明，重现性结果RSD为0.89%，小于1.0%，无显著差异，方法重现性良好。7.3.专属性在规定的测试条件下，取溶剂、对照品溶液、供试品溶液分别进样检测，溶剂峰不干扰盐酸小檗碱峰的检测，实验结果见表9。表9黄栀提取物专属性实验结果溶液名称溶剂对照品溶液供试品溶液盐酸小檗碱峰保留时间（min）——44.73544.683供试品溶液盐酸小檗碱峰保留时间与对照品溶液盐酸小檗碱峰保留时间一致。方法对黄栀提取物中盐酸小檗碱含量的检测具有专属性。7.4.线性与范围在规定范围内，分别制备5份不同浓度的盐酸小檗碱对照品溶液进行测定，以测得的响应值对被测物的浓度进行作图，实验结果见表10。表10黄栀提取物线性实验结果溶液名称浓度（μg/mL）峰面积1峰面积2峰面积平均值线性溶液110.0379212369811374512线性溶液220.0728634736455732545线性溶液350.0183793518237821830859线性溶液4100.0366983536663083668072线性溶液5200.0727985272758567277854线性方程y=36458.809x表10（续）相关系数r0.999973结果呈线性关系，在测试浓度的20%~400%范围内，盐酸小檗碱浓度与峰面积线性关系良好。根据分析方法验证结果，试验方法适用于黄栀提取物中盐酸小檗碱的含量测定。8贮存条件和有效期8.1贮存条件，按照《中华人民共和国兽药典》对提取物贮存的要求，确定该产品贮存条件为冷藏保存。8.2有效期，在满足规定的贮存和运输条件下，产品有效期由生产企业自行规定。

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1性状根据《中华人民共和国兽药典》二部茯苓的质量标准，以及7批来源于湖北、湖南、河南、安徽、贵州、云南、广西、浙江等不同产地的茯苓药材实际性状，确定性状为：茯苓个：呈类球形、椭圆形、扁圆形或不规则团块，大小不一。外皮厚而粗糙，棕褐色至黑褐色，有明显的皱缩纹理。体重，质坚实，断面颗粒性，有的具裂隙，外层淡棕色，内部白色，少数淡红色，有的中间抱有松根。气微，味淡，嚼之粘牙。茯苓块：为去皮后切制的茯苓，呈立方块状或方块状厚片，大小不一。白色、淡红色或淡棕色。茯苓片：为去皮后切制的茯苓，呈不规则厚片，厚薄不一.白色、淡红色或淡棕色。2菌丝显微鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部茯苓【鉴别】项（1）测定。三批不同产地的茯苓均能检出无色不规则颗粒状团块和分枝状团块，遇水合氯醛液渐溶化。菌丝无色或淡棕色，细长，稍弯曲，有分枝，直径3μm～8μm，少数至16μm，显微特征见图1。图1不规则颗粒状团块和分枝状团块(400×)3多糖鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部茯苓【鉴别】项（2）测定。分别取三批不同产地的茯苓粉末少量，加碘化钾碘试液1滴，均显深红色。4茯苓鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部板茯苓【鉴别】项（3）测定。对三批不同产地的茯苓试验结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。结果见图2。图21.茯苓对照药材2-4依次批号20231001、20231002、20231003样品三批不同产地的茯苓均符合规定。5水分按照《中华人民共和国兽药典》二部附录0832干燥失重测定法测定。结果见表1。表1三批样品水分测定结果批号水分（%）平均值（%）RSD%（n=6）202310019.289.249.319.20.318.949.079.17202310028.878.798.999.00.919.318.919.04202310039.109.158.849.11.59.209.179.04批间均一性9.1RSD=1.8%（n=18）三批样品中的水分平均值为9.1%，符合兽药典不能超过18.0%的规定。试验结果表明，批内均一性、批间均一性均符合要求，证明本品工艺稳定。结合兽药典的规定、实测值并考虑实验室间的误差，水分标准在平均值的基础上上调至130%左右，确定水分≤12.0%。6总灰分按照《中华人民共和国兽药典》二部附录2302测定。结果见表2。表2三批样品总灰分测定结果批号总灰分（%）平均值（%）RSD(%)202310010.8980.9170.9250.911.60.9210.9320.892202310020.9690.9450.9270.952.40.9530.9310.992202310030.9430.9620.9860.963.00.9220.9521.01批间均一性0.94RSD=3.3%（n=18）三批样品中的灰分平均值为0.94%，符合兽药典不能超过2.0%的规定。试验结果表明，批内均一性、批间均一性均符合要求，证明本品工艺稳定。考虑实验室间检测误差等因素，灰分标准在平均值的基础上上调至150%左右，定为灰分≤1.5%。7浸出物按照《中华人民共和国兽药典》二部附录2201测定。结果见表3。表3三批样品浸出物测定结果批号浸出物含量（%）平均值（%）RSD(%)202310014.014.064.034.11.14.144.104.05202310024.114.154.094.10.574.154.104.13202310034.084.164.104.10.734.124.094.07批间均一性4.1RSD=0.10%（n=18）三批样品中的浸出物平均值为4.1%，符合兽药典不能少于2.5%的规定。试验结果表明，批内均一性、批间均一性均符合要求，证明本品工艺稳定。虑实验室间检测误差等因素，浸出物标准在平均值的基础上下调至80%左右，定为浸出物不得少于3.0%。8含量测定参考文献方法，茯苓多糖在硫酸作用下脱水生成糠醛衍生物，与苯酚生成橙红色物质，在490nm有最大吸收，用紫外-可见分光光度法测定，对照品比较法定量。8.1仪器设备紫外-可见分光光度计；分析天平：感量0.1mg，0.01mg。8.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水：符合GB/T6682，一级水。50%硫酸：取硫酸50mL，用水稀释至100mL。5%苯酚：取苯酚5mL，用水稀释至100mL。对照品溶液的制备：取经105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加50%硫酸使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。8.3分析步骤8.3.1供试品溶液制备取本品约10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加50%硫酸溶液适量，密塞，用力振摇，超声处理10分钟使溶解，加50%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。再精密量取2mL于10mL量瓶中，用50%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液。8.3.2测定分别精密量取供试品溶液及对照品溶液各2mL置20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚1.8mL，充分混合后，再分别缓慢加入6mL硫酸，立即混匀，25℃水浴40min，取出，以相应试剂作空白参比，在490nm波长处测定吸光度，即得。8.4测定方法优化⑴测定波长的选择取D-葡萄糖对照品和茯苓样品粉末适量，精密称定，照4.2.6.2对照品溶液制备方法和4.2.6.3.1供试溶液制备方法制备，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、纯化水各2mL，于20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，充分混合后，再分别缓慢加入6mL浓硫酸，立即混匀，水浴锅内25℃放置40分钟，以纯化水反应的溶液做空白，在紫外-可见分光光度计上于400-600nm波长范围内进行扫描。结果表明，供试品溶液和对照品溶液在490nm处均有最大吸收，故选择测定波长为490nm，见图3、4。图3供试品溶液UV图谱图4D-无水葡萄糖对照品溶液UV图谱⑵反应温度选择取茯苓粉末样品，照4.2.6.3.1项下供试溶液制备方法制备20mL，精密量取10mL至50mL量瓶中，用50%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，取20mL具塞试管5支，分别精密量取2mL样品于20mL具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.8mL，充分混合后，再分别缓慢加入6mL浓硫酸，立即混匀，5支试管中的样品分别在20℃、25℃、40℃、60℃、80℃水浴，水浴时间40分钟，于490nm波长测定样品吸光度值。结果显示，在25℃水浴条件下反应的溶液吸光度最强，故选择25℃为水浴温度。测定结果见表4。表4反应温度考察结果水浴温度20℃25℃40℃60℃80℃10.25050.26270.23320.22270.229820.25030.26240.23290.22180.228430.25070.26260.23250.22320.224040.25010.26170.23400.22410.226650.25100.26300.23470.22460.2259均值0.2510.2620.2330.2230.227⑶反应时间选择取茯苓样品粉末，照4.2.6.3.1项下的方法配制成供试品溶液，精密量取2mL至10mL量瓶中，用50%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL于20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，充分混合后，再分别缓慢加入6mL浓硫酸，立即混匀，25℃下水浴10分钟、20分钟、40分钟、60分钟、80分钟，于490nm波长处测定样品吸光度值，结果见表5。表5反应时间考察结果水浴时间（min）10203040608010.26430.26260.26200.27110.25960.257420.26440.26300.26340.27030.26040.257830.26410.26370.26350.26980.26000.257740.26450.26350.26310.27130.25970.257050.26460.26410.26340.27040.26010.2579均值0.2640.2630.2630.2710.2600.258结果表明，茯苓多糖在水浴40分钟时，吸光度值最大，因此选择水浴时间为40分钟。苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定。结合反应时间及反应温度因素试验结果，水浴时间过长、温度过高，可能会造成糖醛衍生物与苯酚生成的中间产物不稳定。因此，本方法选用25℃下水浴40分钟的条件。⑷5%苯酚溶液加入量选择取D-葡萄糖对照品适量，照4.2.6.2项下的方法配制成对照品溶液，精密量取2mL至10mL量瓶中，用50%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL于20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL，再分别加入水1.8mL、1.6mL、1.2mL、0.8mL、0.4mL、0.2mL、0mL，充分混合后，再分别缓慢加入6mL硫酸，立即混匀，25℃水浴40分钟，于490nm波长测定样品吸光度值，从图表可见，5%苯酚加入量为1.8mL时，吸光度有最大值，因此5%苯酚加入量定为1.8mL。结果见表6。表65％苯酚加入量考察加入量（mL）0.20.40.81.21.61.82.010.06930.13260.21250.24680.26220.26810.220320.06900.13260.21270.24700.26280.26840.221830.06920.13250.21240.24630.26240.26870.221040.06940.13280.21260.24610.26190.26820.220750.06920.13240.21230.24640.26230.26840.2215均值0.0690.1330.2130.2470.2620.2680.221⑸硫酸加入量选择取D-葡萄糖对照品，照4.2.6.2项下的方法的方法配制成对照品溶液，精密量取2mL至10mL量瓶中，用50%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL于20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，立即混匀，分别精密加入硫酸4.0mL、5.0mL、5.5mL、6.0mL、6.5mL、7.0mL、8.0mL。于490nm波长测定样品吸光度值，从图表可见，在结果表明，硫酸加入量为6.0mL时，测定结果值最大，因此硫酸加入量定为6.0mL。加入硫酸的量偏小，导致水解反应不完全，而加入硫酸过多，可能会造成糖醛衍生物与苯酚生成的中间产物不稳定。测定结果见表7。表7硫酸加入量考察加入量（mL）4.05.05.56.06.57.08.0吸光度（A）0.11840.26220.25520.26100.24300.21860.2030总体积7.88.89.39.810.310.811.8吸光度与体积乘积0.92352.30742.37342.55802.50292.47022.49698.5方法学验证⑴线性关系考察取D-葡萄糖对照品，照4.2.6.2配制成对照品溶液，精密吸取对照品溶液各1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分别置于5个10mL量瓶中，加50%硫酸溶液稀释至刻度，得浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的溶液。精密量取2mL，置20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，充分混合后，再分别缓慢加入6mL硫酸，立即混匀，25℃水浴40分钟，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。得回归方程为Y=0.0125X-0.0678r=0.9994，n=6)，结果见表10，D-无水葡萄糖在10.19μg/mL～61.14μg/mL范围内线性关系良好，结果见表8，回归曲线图见图5。表8D-无水葡萄糖线性关系考察结果葡萄糖对照品浓度（μg/mL）吸光度（A）10.190.060020.380.185230.540.308440.760.448550.850.574461.140.6891图5D-无水葡萄糖线性回归方程图⑵精密度试验取D-葡萄糖对照品6份，照4.2.6.2的方法配制照品溶液，分别精密量取2mL于6支20mL具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，混匀，分别加入硫酸6.0mL，立即混匀，25℃水浴40分钟，于490nm波长测定样品吸光度值。结果见表9。计算其吸光度与重量的比值，RSD值为0.16%，表明该方法精密度良好。表9精密度试验结果试验号123456对照品重量10.1910.2110.2410.2010.2110.22吸光度（A）0.30640.30740.30850.30810.30810.3082吸光度/重量0.030070.030110.030130.030210.030180.03016RSD（%）0.16⑶稳定性试验取茯苓供试品粉末适量，照4.2.6.2的方法配制成供试品溶液，取20mL具塞试管6支，分别精密量取供试品溶液2mL，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，混匀，分别加入硫酸6.0mL，立即混匀，25℃水浴40分钟，取出，暗处放置0、10、20、40、80、120分钟，于490nm波长处测定样品吸光度值，结果见表23。计算吸光度的RSD值为1.66%，表明供试品溶液在制备120分钟内稳定性良好。表10稳定性试验结果放置时间（min）010204080120吸光度（A）0.3330.3390.3450.3440.3480.347RSD（%）1.66⑷重复性试验取茯苓供试品粉末适量，精密称取6份，每份约10mg，照4.2.6.3.1的方法配制供试品溶液，分别精密量取各供试品溶液2mL，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，混匀，分别加入硫酸6.0mL，立即混匀，25℃水浴40分钟，于490nm波长测定样品吸光度值，计算含量。结果见表11，样品中总多糖的平均含量为74.09%，RSD为0.92%，表明本方法重现性好。表11重复性试验结果试验次数总多糖含量（%）±SD(%)RSD(%)173.8574.09±0.770.92274.77374.84474.57573.60672.90⑸加样回收率试验取批号为20231001的样品，称取9份，每份约5mg，精密称定。分别加入D-无水葡萄糖对照品约5mg，照4.2.6.2的方法制成供试品溶液。再精密量取各供试品溶液2mL，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，混匀，分别加入硫酸6.0mL，立即混匀，25℃水浴40分钟，于490nm波长测定样品吸光度值，计算回收率。结果见表12，平均回收率为99.31%，RSD为1.12%，表明方法回收率良好。表12加样回收率试验结果供试品号称样量（mg）含多糖量（mg）加入量（mg）实测量（mg）回收率（％）（%）RSD（％）15.123.30544.127.300098.5199.311.1225.213.38114.027.356699.4734.973.17934.057.010497.3445.213.38114.988.4481100.9355.203.37274.948.185198.6365.283.44005.098.5576100.2975.093.28026.049.215998.9985.123.30545.999.3438100.4795.133.31386.019.245499.24⑹样品的测定取茯苓三批（批号20231001、20231002、20231003），每批样品30g，研细，取6份，每份约10mg，精密称定，照4.2.6.2的方法制成供试品溶液，分别精密量取各供试品溶液2mL，分别加入5%苯酚溶液1.8mL，混匀，分别加入硫酸6.0mL，立即混匀，25℃水浴40分钟，于490nm波长测定样品吸光度值，计算含量。结果见表13。表13三批样品总多糖含量测定结果批号总多糖含量（%）平均值（%）RSD（%）2023100173.8574.7774.8474.090.9274.5773.6072.902023100272.9673.7072.2572.840.9171.7172.9073.522023100374.7872.3074.4273.851.0974.0973.2574.25批间均一性=73.59%RSD%=1.10（n=18）根据上述含量测定结果，考虑到药材的来源及质量差异，以及药材生产储藏等因素的影响，在平均值的基础上下调至80%左右，故暂定本品按干燥品计算，含总多糖以D-无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于60.0%。9贮存和有效期9.1贮存取茯苓块（批号：23040801），按照《中华人民共和国兽药典》一部附录9001【原料药物与制剂稳定性试验指导原则】执行，进行稳定性研究影响因素试验，包括高温、高湿及强光照射试验。结果见表14。表14样品稳定性试验影响因素试验结果表影响因素时间（天）性状吸湿性（%）总多糖（%）//0白色074.12高温5白色减重4.4374.7910白色减重6.2875.06高湿（75%）5白色增重13.5774.4610白色增重20.8574.19强光5白色减重2.4375.0310白色减重3.5774.89结果表明：本品易吸潮，同时在高温及强光照射下，性状、含量稳定。因此本品贮存条件应置干燥处、防潮。9.2有效期规定在符合规定的贮存和运输条件下，贮存期与标签标识一致，即各生产企业自行规定有效期。

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1外观按照取样要求取本品适量，在自然光下明亮处目测观察。对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，结果见表2。表2兽药用聚丙烯封尾管外观检查结果表生产企业批号外观浙江拱东医疗器械股份有限公司2403002色泽均匀一致，无明显色差。管体表面光洁、平整，无变形和明显的擦痕。无缺料，沿口无明显飞边、油污、异物2403005色泽均匀一致，无明显色差。管体表面光洁、平整，无变形和明显的擦痕。无缺料，沿口无明显飞边、油污、异物2403010色泽均匀一致，无明显色差。管体表面光洁、平整，无变形和明显的擦痕。无缺料，沿口无明显飞边、油污、异物石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657色泽均匀一致，无明显色差。管体表面光洁、平整，无变形和明显的擦痕。无缺料，沿口无明显飞边、油污、异物B23122658色泽均匀一致，无明显色差。管体表面光洁、平整，无变形和明显的擦痕。无缺料，沿口无明显飞边、油污、异物B23122659色泽均匀一致，无明显色差。管体表面光洁、平整，无变形和明显的擦痕。无缺料，沿口无明显飞边、油污、异物6批次结果表明外观均符合规定，确定外观要求为：具有均匀一致的色泽，不得有明显色差。管体表面应光洁、平整，不得有变形和明显的擦痕。不得有缺料，沿口无明显飞边、油污、异物等。2红外光谱鉴别取本品适量，照YBB00262004-2015包装材料红外光谱测定法第四法测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，红外光谱与对照图谱基本一致，具体结果汇总表见表3，红外光谱图见图1~图4。表3红外光谱测定结果生产企业批号结果浙江拱东医疗器械股份有限公司2403002符合规定2403005符合规定2403010符合规定石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657符合规定B23122658符合规定B23122659符合规定图1聚丙烯对照图谱图22403002批兽药用聚丙烯封尾管图谱图32403005批兽药用聚丙烯封尾管图谱图42403010批兽药用聚丙烯封尾管图谱6批次红外图谱特征峰均与聚丙烯对照图谱基本一致，根据YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定，确定红外光谱鉴别要求为：应与对照图谱基本一致。3密度取本品2g±0.2g，加水100mL，回流2小时，放冷，80℃干燥2小时后，照YBB00132003密度测定法测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表4。表4密度测定结果生产企业批号结果（g/cm3）浙江拱东医疗器械股份有限公司24030020.90924030050.90924030100.911石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226570.905B231226580.904B231226590.9056批次密度平均值为0.907，考虑不同企业生产工艺可能不同和实验室间误差等因素，确定密度范围为：0.900g/cm3~0.915g/cm3。4抗跌落根据YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶方法，对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次产品进行测定，具体结果见表5。表5抗跌落检测结果表生产企业批号结果浙江拱东医疗器械股份有限公司2403002符合规定2403005符合规定2403010符合规定石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657符合规定B23122658符合规定B23122659符合规定6批次抗跌落结果均未破裂，根据YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定，确定抗跌落要求为：应不得破裂。5水蒸气透过量按照取样要求取本品适量，精密称重，在封尾管中加水至标示容量，封口后精密称重。照YBB00092003-2015水蒸气透过量测定法第三法（1）在温度20°C±2°C，相对湿度65%±5%条件下，放置14天。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表6。表6水蒸气透过量结果表生产企业批号结果（%）浙江拱东医疗器械股份有限公司24030020.1224030050.1324030100.12石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226570.10B231226580.15B231226590.106批次检测结果平均值为0.12%，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定和实验室间的检测误差，确定水蒸气透过量要求为：不得过0.2%。6炽灼残渣取本品2g±0.2g，照《中华人民共和国兽药典》一部附录测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次含遮光剂样品进行测定，同时对石家庄鑫富达医药包装有限公司1个厂家3批次不含遮光剂样品进行测定，具体结果见表7和表8。表7不含遮光剂炽灼残渣检测结果表生产企业批号结果（%）石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226510.002B231226540.003B231226560.002表8含遮光剂炽灼残渣检测结果表生产企业批号结果（%）浙江拱东医疗器械股份有限公司24030020.6724030050.8624030100.80石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226570.77B231226580.80B231226590.86不含遮光剂3批次检测结果平均值为0.002%，含遮光剂6批次检测结果平均值为0.79%，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定和实验室间检测误差，规定遗留残渣不得过0.1%（含遮光剂的遗留残渣不得过3.0%）7溶液澄清度取水供试液，照澄清度检查法《中华人民共和国兽药典》一部附录测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表9。表9溶液澄清度检测结果表生产企业批号结果浙江拱东医疗器械股份有限公司2403002符合规定2403005符合规定2403010符合规定石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657符合规定B23122658符合规定B23122659符合规定6批次溶液澄清度结果均符合规定，参照中华人民共和国兽药典标准规定，确定溶液澄清度要求为：溶液应澄清；如显浑浊，与2号浊度标准液比较，不得更浓。8pH变化值取水供试液与水空白液各20mL，分别加入氯化钾溶液（1→1000）1.0mL，照pH值测定法《中华人民共和国兽药典》一部附录测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表10。表10pH变化值检测结果表生产企业批号结果浙江拱东医疗器械股份有限公司24030020.524030050.624030100.5石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226570.4B231226580.4B231226590.56批次检测结果平均值为0.5，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定和实验室间的检测误差，确定pH变化值要求为：水供试液与空白液之差不得过1.0。9吸光度取水供试液适量，照紫外-分光光度法《中华人民共和国兽药典》一部附录测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表11。表11吸光度检测结果表生产企业批号结果浙江拱东医疗器械股份有限公司24030020.03424030050.04024030100.036石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226570.044B231226580.047B231226590.0396批次检测结果平均值为0.04，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定和实验室间检测误差，确定吸光度要求为：在220mm~360mm波长范围内的最大吸收度不得过0.10。10易氧化物精密量取水供试液20mL，精密加入高锰酸钾滴定液（0.002mol/L）20mL与稀硫酸1mL，煮沸3分钟，迅速冷却，加入碘化钾0.1g，在暗处放置5分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，滴定至近终点时，加入淀粉指示液5滴，继续滴定至无色，另取水空白液同法操作。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表12。表12易氧化物检测结果表生产企业批号结果（mL）浙江拱东医疗器械股份有限公司24030020.624030050.724030100.6石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226570.2B231226580.3B231226590.46批次检测结果平均值为0.5mL，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定，确定易氧化物要求为：水供试液和水空白液消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）之差不得过1.5mL。11不挥发物分别精密量取水、65%乙醇、正己烷供试液与空白液各50mL置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105°C干燥2小时，冷却后，精密称定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表13。表13易氧化物检测结果表生产企业批号结果（mg）水65%乙醇正己烷浙江拱东医疗器械股份有限公司24030023.08.341.424030053.07.642.124030103.98.040.9石家庄鑫富达医药包装有限公司B231226571.15.157.2B231226581.55.657.9B231226591.45.457.66批次水不挥发物检测结果平均值为2.3mg，6批次65%乙醇不挥发物检测结果平均值为6.7mg，6批次正己烷不挥发物检测结果平均值为49.5mg，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定和实验室间的检测误差，确定不挥发物要求为：水不挥发物残渣与其空白液残渣之差不得过12.0mg；65%乙醇不挥发物残渣与其空白液残渣之差不得过50.0mg；正己烷不挥发物残渣与其空白液残渣之差不得过75.0mg。12重金属精密量取水供试液20mL，加醋酸盐缓冲液（pH值3.5）2.0mL，照《中华人民共和国兽药典》一部附录测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表14。表14重金属检测结果表生产企业批号结果浙江拱东医疗器械股份有限公司2403002符合规定2403005符合规定2403010符合规定石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657符合规定B23122658符合规定B23122659符合规定6批次重金属结果为均符合规定，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定，确定重金属要求为：含重金属不得过百万分之一。13脱色试验（着色产品）分别取本品表面积约50cm2（以内表面计）三份，剪成2.0cm×0.3cm小片，分置3个具塞锥形瓶中，分别加入4%醋酸溶液（60°C±2°C），65%乙醇溶液（25°C±2°C），正己烷（25°C±2°C）50mL浸泡2小时，以同批4%醋酸溶液、65%乙醇溶液、正己烷为空白液，同法操作。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表15。表15脱色试验检测结果表生产企业批号结果4%醋酸65%乙醇正己烷浙江拱东医疗器械股份有限公司2403002均符合规定2403005均符合规定2403010均符合规定石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657均符合规定B23122658均符合规定B23122659均符合规定6批次4%醋酸、65%乙醇和正己烷溶液脱色试验均符合规定，参照YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶标准规定，确定脱色试验（着色产品）要求为：浸泡液颜色不得深于空白液。14微生物限度按照取样要求取本品数支，加入pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液300mL，振荡1分钟后，即得供试液。供试液进行薄膜过滤后，照《中华人民共和国兽药典》一部附录测定。依照上述方法对浙江拱东医疗器械股份有限公司和石家庄鑫富达医药包装有限公司2个厂家各3批次进行测定，具体结果见表16。表16微生物限度检测结果表生产企业批号结果（cfu/支）需氧菌霉菌和酵母菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌浙江拱东医疗器械股份有限公司240300242未检出未检出240300563未检出未检出240301062未检出未检出石家庄鑫富达医药包装有限公司B23122657<10<1未检出未检出B23122658<10<1未检出未检出B23122659<10<1未检出未检出6批次微生物限度需氧菌均不得过100cfu/支，霉菌和酵母菌不得过10cfu/支，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均不得检出，参照《中华人民共和国兽药典》标准规定，确定微生物限度要求为：需氧菌不得过100cfu/支，霉菌和酵母菌不得过10cfu/支，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均不得检出。15取样要求YBB00082002-2015口服液体药用聚丙烯瓶和YBB00072002-2015聚丙烯药用滴眼剂瓶标准附件检验规则规定：外观、抗跌落、水蒸气透过量、微生物限度的检验按GB/T2828.1-2012规定执行计数抽样检验程序。兽药用聚丙烯封尾管参考上述同材质药包材国家标准，制定外观、抗跌落、水蒸气透过量和微生物限度的取样要求如下：外观、抗跌落、水蒸气透过量、微生物限度的检验，按《计数抽样检验程序第1部分：按接收质量限（AQL）检索的逐批检验抽样计划》（GB/T2828.1）规定进行，检验项目、检验水平及接收质量限见表17。表17检验项目、检验水平及接收质量限检验项目检验水平接收质量限（AQL）外观Ⅰ4.0抗跌落S-34.0水蒸气透过量S-24.0微生物限度S-11.516贮存贮存环境要求应为干燥、通风良好的室内，周围无有害或腐蚀性物品。

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1性状取样品约2.0g，于表面皿中，在自然光下观察。累计观察山东金铸基药业有限公司公示生产样品3批次，结果见表2。表2柏麻提取物形状观察结果汇总表生产企业批号性状山东金铸基药业有限公司20231201棕黄色膏状体山东金铸基药业有限公司20231202棕黄色膏状体山东金铸基药业有限公司20231203棕褐色膏状体根据观察结果确定产品性状为：棕黄色至棕褐色膏状体。2盐酸小檗碱鉴别按照《兽药质量标准》（2017版）中药卷柏麻口服液【鉴别】（1），柏麻口服液【鉴别】（1）项中取样量为50mL，相当于中间产品柏麻提取物25g，确定取样量为25g±2.5g。按标准中给出的方法：加硅藻土研匀，80℃烘干，加甲醇适量，置水浴加热回流15分钟，滤过，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。对山东金铸基药业有限公司生产的3批产品进行了薄层色谱鉴别，结果见图1。图1盐酸小檗碱薄层鉴别根据检测薄层色谱图，确定该方法适用于该产品盐酸小檗碱鉴别。3盐酸麻黄碱鉴别按照《兽药质量标准》（2017版）中药卷柏麻口服液【鉴别】（2），柏麻口服液【鉴别】（2）项中取样量为50mL，相当于中间产品柏麻提取物25g，确定取样量为25g±2.5g。按标准中给出的方法：加浓氨试液1mL使成碱性，用乙醚乙醇(8:2混合液提取2次，每次10mL，合并提取液，并用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述两种溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰酷酸-水(8:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮丙酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。对山东金铸基药业有限公司生产的3批产品进行了薄层色谱鉴别，结果见图2。图2盐酸麻黄碱薄层鉴别根据检测薄层色谱图，确定该方法适用于该产品盐酸麻黄碱鉴别。4大青叶鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部柏麻口服液【鉴别】（3），柏麻口服液【鉴别】（3）项中取样量为50mL，相当于中间产品柏麻提取物25g，确定柏麻提取物取样量为25g±2.5g。。按标准中给出的方法：浓缩至近干，残渣加乙醇20mL使解，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液。另取大青叶对照药材1g，加乙醚20mL，置水浴上加热回流1小时，滤过，弃去滤液，滤渣加70%乙醇20mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述两种溶液5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-浓氨试液-水(8:8:1:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。对山东金铸基药业有限公司生产的3批产品进行了薄层色谱鉴别，结果见图3。图3大青叶薄层鉴别根据检测薄层色谱图，确定该方法适用于该产品大青叶的鉴别。5相对密度按照《中华人民共和国兽药典》二部附录0601相对密度测定法（比重瓶法）中的规定执行。具体数据见下方表3，结果检测数据均在此范围。表3柏麻提取物相对密度结果汇总表批号相对密度平均值RSD（%）202312011.151.161.151.160.711.151.161.17202312021.171.161.171.170.761.181.181.16202312031.191.201.181.190.751.201.181.19批间均一性（x?）1.171.39（n=18）实验结果表明相对密度的平均值为1.17，批内均一性、批间均一性均符合要求，说明本品工艺稳定。确定柏麻提取物的相对密度为1.15~1.20。6pH值按照《中华人民共和国兽药典》二部附录0631pH值测定法中的规定执行。具体数据见下方表4，结果检测数据均在此范围。表4柏麻提取物pH值结果汇总表批号pH值平均值RSD（%）202312014.874.854.884.860.674.844.814.90202312024.914.924.884.890.474.894.874.86202312035.015.005.045.150.655.025.055.09批间均一性（x?）4.931.71（n=18）根据三批平行样结果的平均值为4.93，结合最终柏麻口服液的pH值范围，最终确定柏麻提取物的pH值应为4.5~5.6。7盐酸麻黄碱含量测定按照《兽药质量标准》2017年版中药卷柏麻口服液并无含量测定，为保证产品质量，因此对麻黄进行含量控制。我们对《中华人民共和国兽药典》以及《兽药质量标准》2017版中涉及麻黄含量检测的液相方法进行汇总和实验，最终确定一个适合的液相含量测定方法。方法如下。取本品约2.5g，精密称定，加浓氨试液1mL使成碱性，用乙醚-乙醇混合溶液提取2次，每次10mL，合并提取液，无水硫酸钠脱水，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加甲醇使溶解转移至25mL量瓶中，分析洗涤，最后加甲醇至刻度，摇匀。精密量取2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。因此为保证产品质量，我们进行了多批实验室小试验证，确定含量每1g提取物中含麻黄以盐酸麻黄碱（C10H15NO·HCl）计，≥0.10mg。在此指标要求下产品质量稳定，实验结果见表5。表5柏麻提取物盐酸麻黄碱含量测定结果汇总表批号盐酸麻黄碱，mg/g平均值RSD（%）202312010.1470.1450.1450.150.840.1470.1450.144202312020.1450.1440.1440.150.520.1460.1450.145202312030.1460.1470.1470.140.790.1480.1490.146批间均一性（x?）0.150.98（n=18）三批样品中盐酸麻黄碱的含量平均值为0.15mg/g。实验结果表明，批内均一性、批间均一性均符合要求，证明本品工艺稳定。考虑到实验室间检测误差、工艺条件等因素，含量标准在平均值的基础上下调至80%左右，定为盐酸麻黄碱含量不得少于0.10mg/g。分析方法验证：本标准试验方法参照并引用了《中华人民共和国兽药典》二部柏麻口服液以及《兽药质量标准》（2017版）中药卷柏麻口服液。因此参照《中华人民共和国兽药典》一部附录9101兽药质量标准分析方法验证指导原则进行分析方法验证，证实此方法适用兽药制剂用柏麻提取物的相应检测要求。7.1.准确度在规定范围内，取同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品，向已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。用6份样品的测定结果进行评价，回收率在在90%~108%之间，实验结果见表6。表6柏麻提取物准确度实验结果序号已知含量（mg）测得量加标量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（mg）（%）10.0910.2140.125100.93100.540.1920.0910.2150.125100.4730.0910.2150.125100.4740.0910.2150.125100.4750.0910.2150.125100.4760.0910.2150.125100.47实验结果表明，平均回收率为100.54%，回收率RSD为0.19%，小于2%，方法可对盐酸麻黄碱含量进行准确测定。7.2.精密度7.2.1.重复性在规定的测试条件下，同一份均匀供试品，经同一分析人员使用同一分析设备6次取样测定所得结果之间的相对标准偏差（RSD）不得过1.0%，实验结果见表7。表7柏麻提取物重复性实验结果样品123456含量，mg/g0.1860.1870.1870.1870.1870.186平均含量，mg/g0.186RSD，%0.28实验结果表明，重复性结果RSD为0.28%，小于1.0%，无显著差异，方法重复性良好。7.2.2.重现性在规定的测试条件下，同一供试样品在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，相对标准偏差（RSD）不得过1.0%，实验结果见表8。表8柏麻提取物重现性实验结果样品123456含量，mg/g0.1830.1810.1850.1840.1850.182平均含量，mg/g0.18RSD，%0.89实验结果表明，重现性结果RSD为0.89%，小于1.0%，无显著差异，方法重现性良好。7.3.专属性在规定的测试条件下，取溶剂、对照品溶液、供试品溶液分别进样检测，溶剂峰不干扰盐酸麻黄碱峰的检测，实验结果见表9.表9柏麻提取物专属性实验结果溶液名称溶剂对照品溶液供试品溶液盐酸麻黄碱峰保留时间（min）——17.90117.919供试品溶液盐酸麻黄碱峰保留时间与对照品溶液盐酸麻黄碱峰保留时间一致。方法对柏麻提取物中盐酸麻黄碱含量的检测具有专属性。7.4.线性与范围在规定范围内，分别制备5份不同浓度的盐酸麻黄碱对照品溶液进行测定，以测得的响应值对被测物的浓度进行作图，实验结果见表10。表10柏麻提取物线性实验结果溶液名称浓度（μg/mL）峰面积1峰面积2峰面积平均值线性溶液145.8123038110627116832.5线性溶液291.6208897205852207374.5线性溶液3229501781498809500295线性溶液445899881310080461003429.5线性溶液5916199082719904751990651线性方程y=2178.478x+0.67相关系数r0.999826实验结果呈线性关系，在测试浓度的20%~400%范围内，盐酸麻黄碱浓度与峰面积线性关系良好。根据分析方法验证结果，试验方法适用于柏麻提取物的含量测定。8贮存条件和有效期8.1贮存条件，按照《中华人民共和国兽药典》对提取物贮存的要求，确定该产品贮存条件为冷藏保存。8.2有效期，在满足规定的贮存和运输条件下，产品有效期由生产企业自行规定。

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1性状按照《中华人民共和国兽药典》二部附录“药材和饮片检定通则”，以及13批来源于福建、四川、安徽、陕西、浙江、湖北等不同产地的香菇药材（见表2）实际性状在自然光下观察样品外形、色泽、表面特征、剖面，测量菌盖直径、菌柄的长度与粗细，并嗅其气味、口尝味感。各样品的外观见图1。表2香菇样品种类及等级样品号产地种类等级样1浙江厚菇一级样2浙江厚菇二级样3浙江花菇一级样4浙江薄菇一级样5浙江薄菇二级样6福建古田花菇特级样7福建古田厚菇一级样8四川青川花菇一级样9四川青川厚菇二级样10浙江薄菇等外样11安徽厚菇一级样12陕西厚菇一级样13湖北花菇特级图1各样品实物图片根据不同来源的香菇外观观察，确定性状如下：子实体菌盖直径在3cm～12cm之间，半球形或扁平球形至稍平展。表面菱色、浅褐色、深褐色至深肉桂色，有深色鳞片，有的有天然裂纹，菌肉白色，细密。菌褶白色，密、弯生、不等长。干品菌柄中生至偏生，白色，常弯曲，长0.8cm～3cm，直径0.5cm～1cm，内实，纤维质。有香菇特有香味，微甘。2菌丝、孢子显微鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部附录显微鉴别法（2001）执行。2.1仪器设备生物显微镜。2.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水：符合GB/T6682，一级。水合氯醛。甘油。水合氯醛试液制备：取水合氯醛50g，加水15mL与甘油10mL使溶解，即得。2.3分析步骤取本品少量，置载玻片上，摊平，选用水合氯醛试液，用酒精灯加热至泡沸，反复2次，放冷后，盖上盖玻片，置显微镜下观察，即得。13批不同来源的香菇均具有如下共性显微特征：菌丝众多，无色透明，具有分支和横隔孢子椭圆形，有时一端稍尖，无色，壁表面光滑，长5μm～7μm，宽3μm～4μm。显微特征见图2。图2菌丝、孢子显微特征(400×)从左至右依次为厚菇、花菇、薄菇3木糖、半乳糖、葡萄糖鉴别按照《中华人民共和国兽药典》二部薄层色谱法（附录0502）执行。本标准从香菇中提取多糖，并将多糖水解成单糖，通过薄层色谱法检出特有的单糖组成，用于香菇的鉴别。十三批不同来源供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点。对方法进行了稳定性、重复性、专属性试验，结果证明该方法可行。3.1方法学验证3.1.1香菇多糖的制备将香菇样品粉碎成粗粉，称取粉末20g±2g，加水400mL，煎煮60min，过滤，滤渣再加水300mL，煎煮60min，过滤，合并滤液，浓缩至40mL左右（室温），加入乙醇使含醇量达60%，边加边搅，静置过夜，过滤，取沉淀，先加60%乙醇50mL洗涤，再加适量95%乙醇洗涤，60℃真空干燥，得多糖样品。3.1.2溶液制备单糖溶液称取半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖，分别溶于水中，制得5种单糖溶液，浓度均为5.0mg/mL。混合糖溶液分别取上述5种单糖溶液，等量混合，制得混合糖溶液。显色剂苯胺-二苯胺-丙酮溶液（将2g二苯胺、2mL苯胺溶于100mL丙酮中，再加入10mL85％磷酸）。展开剂展开剂1：正丁醇-吡啶-水（10:4:6）；展开剂2：乙酸乙酯-甲醇-乙酸-水（13:3:3:1）；展开剂3：乙酸乙酯-乙醇-吡啶-水（8:2:2:1）。3.1.3展开剂的选择将各单糖溶液3μL、混合糖溶液5μL分别点于同一硅胶H薄层板上。同法点3块相同薄层板。分别置3种不同展开剂中，斜向上行展开，晾干，喷显色剂，置85℃，烘10分钟。结果，只有展开剂3可将5种单糖完全分离（见图3），故选用展开剂3。1：混合单糖；2：半乳糖；3：葡萄糖；4：阿拉伯糖；5：木糖；6：鼠李糖图3展开剂的选择3.1.4硅胶薄层板的选择将各单糖溶液3μL、混合糖溶液5μL分别点于同一硅胶H薄层板（10cm×20cm），同法再点于硅胶G薄层板（10cm×20cm）以及硅胶G薄层板（10cm×10cm）上，分别置展开剂3中，斜向上行展开，晾干，喷显色剂，置85℃，烘10分钟。结果，硅胶H薄层板（10cm×20cm）分离效果最好（见图4）。故继续试验选用硅胶H薄层板（10cm×20cm）。1：混合单糖；2：半乳糖；3：葡萄糖；4：阿拉伯糖；5：木糖；6：鼠李糖图4硅胶薄层板的选择3.1.5香菇多糖水解液中单糖组分确认多糖水解液的制备取香菇多糖样品0.1g，加1moL/L硫酸溶液6.5mL，密封，置水浴中水解4小时，取出，放冷，加碳酸钡（固体）中和至中性，滤过，滤液作为多糖样品水解液。层析分离将样1、样2、样3、样4、样5多糖样品水解液各5μL、混合糖溶液5μL、各单糖溶液3μL点于同一硅胶H薄层板（10cm×20cm）上，分别置展开剂3中，斜向上行展开，晾干，喷显色剂，置85℃，烘10分钟。结果各多糖样品水解液的色谱中均可见3个斑点，且分别与半乳糖、葡萄糖、木糖相对应（见图5）。表明用本方法试验可检出香菇多糖的单糖组分——半乳糖、葡萄糖、木糖。左图：1：样1多糖水解液；2：样3多糖水解液；3：混合单糖；4：半乳糖；5：葡萄糖；6：阿拉伯糖；7：木糖；8：鼠李糖右图：1：混合单糖；2：样2多糖水解液；3：样4多糖水解液；4：样5多糖水解液；5：鼠李糖；6：木糖；7：阿拉伯糖；8：葡萄糖；9：半乳糖图5香菇多糖水解液中单糖组分确认3.1.6重复性试验取样1，按3.1.1方法制备多糖，按3.1.5方法制备多糖水解液，以葡萄糖溶液、半乳糖溶液、木糖溶液为对照品液。分别取多糖水解液、对照品液各3μL点于同一硅胶H薄层板（10cm×20cm）上，按3.1.5试验。上述操作重复4次。结果，各样品多糖水解液色谱中均有3个与对照品液对应的斑点（见图6），表明本方法重复性较好。1：葡萄糖；2：半乳糖；3：木糖；4：样1多糖水解液图6重复性试验3.1.7定性试验按上述方法制备样1多糖水解液，冷藏备用。用同一样品水解液按3.1.5法进行层析试验，1天1次，连续5次。结果，所有样品水解液色谱中均有3个分别与葡萄糖、半乳糖、木糖对照品对应的斑点。说明样品水解液制备后，在5天内试验，结果稳定。3.1.8专属性试验取样1多糖水解液。另取相同样品多糖0.1g,加水6.5mL，水浴溶解，作样1多糖溶液。另取市场中多见的多糖类产品——黄芪多糖（鹿邑神农植物科技发展有限公司）按3.1.5法制备黄芪多糖水解液。取样1多糖水解液、样1多糖溶液、黄芪多糖水解液各3μL、对照品液各3μL点于同一硅胶H薄层板（10cm×20cm）上，进行层析试验。结果，样1多糖水解液有3个与对照品液对应的斑点，样1多糖溶液无斑点，黄芪多糖水解液只有葡萄糖对应斑点（见图7）1：样1多糖水解液；2：样1多糖溶液3：黄芪多糖水解液；4：半乳糖；5：葡萄糖；6：木糖图7专属性试验3.1.9香菇样品鉴别取样1～样13共13个样品，分别按3.1.1方法制备多糖，按3.1.5方法制备多糖水解液。分别取样品多糖水解液、半乳糖、葡萄糖、木糖对照品液各3μL点于同一硅胶H薄层板（10cm×20cm）上，进行层析试验。结果，所有样品供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点（见图8）。1：葡萄糖；2：半乳糖；3：木糖图8各样品多糖水解液色谱图4水分按照《中华人民共和国兽药典》二部水分测定法（附录0832）第一法执行。结果见表3。表3香菇水分测定结果表香菇样品号来源水分（%）样1浙江产，厚菇，一级9.36样2浙江产，厚菇，二级9.56样3浙江产，花菇，一级10.03样4浙江产，薄菇，一级10.63样5浙江产，薄菇，二级10.59样6福建古田产，花菇，特级10.93样7福建古田产，厚菇，一级9.65样8四川青川产，花菇，一级9.82样9四川青川产，厚菇，二级10.05样10浙江产，薄菇，等外10.11样11安徽厚菇一级9.56样12湖北花菇特级9.38样13陕西厚菇一级10.05结果表明：13批次香菇水分平均值9.99%，符合GH/T1013-1998《中华全国供销合作总社行业标准香菇》中水分≤13.0%的规定，参考此标准，加之考虑到产地、加工等及实验室间检测误差等因素，将水分的限度确定为：≤13.0%。5总灰分按照《中华人民共和国兽药典》二部附录灰分测定法(2302)总灰分测定法执行，【总灰分】项中取样量为3.0g，相当于香菇粉末3.0g，确定取样量为3.0g。其他按附录2302总灰分测定法执行。结果见表4。表4香菇总灰分测定结果表香菇样品号来源总灰分（%）样1浙江产，厚菇，一级5.76样2浙江产，厚菇，二级4.76样3浙江产，花菇，一级2.76样4浙江产，薄菇，一级2.96样5浙江产，薄菇，二级4.98样6福建古田产，花菇，特级2.99样7福建古田产，厚菇，一级3.56样8四川青川产，花菇，一级3.12样9四川青川产，厚菇，二级5.02样10浙江产，薄菇，等外5.85样11安徽厚菇一级2.98样12湖北花菇特级2.93样13陕西厚菇一级3.66结果表明：香菇总灰分均在6.0%以下，均未超过GH/T1013-1998《中华全国供销合作总社行业标准香菇》中灰分≤7.0%的规定，参考此标准，加之考虑到产地、加工和实验室间误差等因素，将总灰分的限度确定为：≤7.0%。6特征图谱为了保证香菇多糖的研究及提取生产时原料质量的稳定，本标准进行了“香菇中多糖组分的特征图谱研究”,试料中的多糖组分，采用高效分子排阻色谱法进行分离，不同分子量的多糖相对保留时间不同，从而建立香菇多糖组分的特征图谱。6.1试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水：符合GB/T6682，一级。磷酸二氢钾。无水乙醇。95%乙醇。D-无水葡萄糖对照品：含量测定用。0.02mol/L磷酸二氢钾溶液：取磷酸二氢钾2.72g，用水稀释至1000mL。60%乙醇：取无水乙醇60mL，用水稀释至100mL。参照物溶液的制备：取D-无水葡萄糖对照品（CAS:50-99-7,纯度：99.9%）50mg，精密称定，置100mL量瓶中，加0.02mol/L磷酸二氢钾溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。6.2仪器设备高效液相色谱仪：配示差折光检测器；色谱柱：凝胶色谱柱，G4000PWxl，7.8mm×300mm，10μm，或性能相当者；分析天平：感量0.1mg，0.01mg；真空干燥箱:真空度0.1MPa，精度±1℃；旋转蒸发仪。6.3液相色谱参考条件流动相：0.02moL/L磷酸二氢钾溶液。流速：0.6mL/min。柱温：30℃。6.4供试品溶液的制备将香菇样品粉碎成粗粉，称取粉末20g±2g，加水400mL，煎煮60min，过滤，滤渣再加水300mL，煎煮60min，过滤，合并滤液，浓缩至40mL左右（室温），加入乙醇使含醇量达60%，边加边搅，静置过夜。过滤，取沉淀，先加50mL60%乙醇洗涤，再加适量95%的乙醇洗涤，60℃真空干燥，即得。称取提取的香菇多糖30.0mg，精密加入流动相10mL，密封，水浴溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。6.5分析方法验证6.5.1精密度试验按上述色谱条件，取参照物溶液，连续5次进样，分别记录30min，葡萄糖色谱峰的保留时间、峰面积见表5，RSD分别为0.02%、0.95%，表明系统的精密度较好。色谱图见图9。表5精密度试验结果进样序号12345RSD(%)保留时间17.78517.78617.78917.79117.7950.02峰面积1419021443061456631438591445390.95图9精密度试验色谱图6.5.2稳定性试验取供试品溶液，分别在0h，2h，4h，6h，8h，12h进样测定，以参照物溶液的葡萄糖峰为参照，考察色谱中第一个峰（峰1）和第二个峰（峰2），分别计算相对于外标葡萄糖峰的相对保留时间。结果显示，供试品溶液配制后12h内进样检测，2个多糖峰的相对保留时间均无显著变化，RSD在0.1%以下，表明方法稳定性良好。结果见表6及图10。表6稳定性试验结果进样时间（h）相对保留时间峰1峰2峰3峰4峰500.51080.61550.85020.93100.982920.51090.61580.85150.93080.982840.51090.61610.85180.93030.982960.51110.61640.85210.93050.983380.51180.61640.85190.93050.9835表6（续）120.51140.61590.85160.93030.9833RSD(%)0.080.060.080.030.03图10稳定性试验色谱图6.5.3重复性试验取供试品溶液，在上述色谱条件下，分别进样测定，计算各色谱峰相对于外标葡萄糖峰的相对保留时间及峰1、峰2相对峰面积，考察各供试品溶液间的变化。结果见表7及图11。峰1、峰2、峰3、峰4相对保留时间的RSD分别为0.31%、0.38%、0.31%、0.05%，峰1、峰2相对峰面积的RSD分别为8.16%、6.07%。表7重复性试验结果进样相对保留时间相对峰面积序号峰1峰2峰3峰4峰1峰210.51210.58890.86760.98701.04972.005820.51290.59360.86610.98811.14452.325230.51440.59000.86470.98791.30142.190740.51000.58830.86170.98821.11752.244850.51270.59220.86150.98761.20372.3394RSD(%)0.310.380.310.058.166.07图11重复性试验色谱图6.5.4样品测定分别取13批不同来源的香菇，照6.4制备供试品溶液，在上述色谱条件下，分别进样，记录色谱图。结果显示，13批供试品色谱中均呈现4个特征峰，4个特征峰的相对保留时间均在规定值的±5%之内，规定值为：0.508（峰1）、0.618（峰2）、0.866（峰3）、0.988（峰4）。结果见表8及图12。表813批样品中各色谱峰相对保留时间样品号相对保留时间峰1峰2峰3峰410.51930.61790.85750.987620.51080.61550.85020.982930.51350.61480.86610.986040.49470.63420.85930.993450.49230.63530.86970.991860.51170.60340.85830.983770.50100.66520.85980.983280.52480.61340.88861.011790.51850.64060.87170.9908100.48540.62920.86180.9835110.50810.58670.86690.9842120.50650.58860.87200.9848130.51210.58890.86760.9870均值0.50760.61800.86560.9885RSD(%)2.263.731.130.79图12各供试品溶液色谱图7含量测定糖类物质在浓硫酸作用下脱水，生成糠醛或糠醛的衍生物，糠醛能与芳香族化合物缩合生成红色化合物，该有色化合物在490nm有最大吸收，测定490nm处的吸光度，就能计算出多糖浓度。用本方法测出的粗多糖含量结果更能反映用于提取香菇多糖的原料质量优劣。因此为了有效控制产品质量，粗多糖含量以无水葡萄糖计作为质量控制指标。本标准试验方法参照并引用了中华人民共和国农业行业标准NY/T1676-2023《食用菌中粗多糖的测定分光光度法》含量测定项下样品制备。7.1试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水：符合GB/T6682，一级。无水乙醇。硫酸。苯酚。D-无水葡萄糖对照品：含量测定用。80%乙醇：取无水乙醇80mL，用水稀释至100mL。苯酚蒸馏：将苯酚置于80℃的水浴中溶解，然后将一定量的苯酚移至蒸馏瓶中。放入玻璃珠数粒，于182℃蒸馏，弃去最初2min～3min蒸馏液，收集随后的蒸馏液，待冷却后备用。5%苯酚：重蒸馏过的苯酚5mL，用水稀释至100mL。现用现配。对照品溶液的制备：取D-无水葡萄糖对照品（CAS:50-99-7,纯度：99.9%）10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL，置10mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。7.2仪器设备紫外分光光度计:精度±0.3nm,波长范围190nm～1100nm；分析天平：感量0.1mg，0.01mg；离心机：转速不低于5000rpm；真空干燥箱:真空度0.1MPa，精度±1℃。7.3试验步骤7.3.1试液制备取本品粉末（过三号筛）0.5g±0.05g，精密称定，置50mL三角烧瓶中，用5mL水浸润，缓慢加入20mL无水乙醇，混匀，置超声提取器中提取30min。4000rpm离心10min，弃去上清液。沉淀用80%乙醇溶液10mL洗涤，同法离心。用50mL水将沉淀转入圆底烧瓶中，置水浴中回流提取2h。放冷，过滤，残渣用水洗涤2～3次，合并滤液转移至1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。7.3.2定量测定精密量取试液及对照品溶液各1mL，分别置20mL具塞试管中，精密加5%苯酚1.0mL，摇匀，再迅速精密加5mL硫酸，立即混匀，放置10min。置30℃水浴中反应20min，取出，放置至室温，以相应试剂作空白参比，在490nm波长处测定吸光度，即得。7.4分析方法验证7.4.1线性标准曲线的制备：精密吸取浓度为0.1mg/mL的对照品溶液0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置20mL玻璃试管中，用水补至1.0mL。得浓度分别为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL，向试管中精密加入5%苯酚溶液（临用现配）1.0mL，摇匀，迅速精密加入5.0mL浓硫酸与液面垂直加入，勿接触试管壁），静置10min，用旋涡震荡器使反应液充分混合，然后将试管置于30℃水浴中反应20min,迅速冷却，转移至1cm比色皿中，在490nm处测定吸光度值。吸光度值为纵坐标，以葡萄糖的质量为横坐标，绘制标准曲线。结果表明：无水葡萄糖在浓度为0-100μg/mL范围内，线性关系均良好。结果见表9与图13。表9线性试验结果表组分对照品浓度(μg/mL)吸光度（A）线性关系无水葡萄糖00y=9.0382x-0.0181，R=0.9993200.181400.361600.542800.7231000.902图13标准曲线7.4.2重复性分取同一批号样品6份，按7.3.2测定含量。结果表明：无显著差异，方法重现性良好。结果见表10。表10重复性试验结果表序号取样量（g）粗多糖含量（%）10.50529.6120.50189.3230.50369.5140.50089.7150.50969.8760.50419.62平均//9.61RSD(%)//1.937.4.3回收率精密称取自制产品（主产地药材），批号：23040801，约0.25g，共9份，分别置9个具塞锥形瓶中，照7.3.1操作，在圆底烧瓶中均精密加入无水葡萄糖对照品0.018g、0.022g、0.026g照7.3.2测定。结果表明：回收率都在90%~110%之间，验证结果合格。结果见表11。表11回收率试验结果表取样量（g）样品含量（g）加入量（mg）测得总量（g）回收率%平均值%RSD%0.25010.022190.0180.04025100.398.31.40.25040.022200.0180.0398498.00.25050.022140.0180.0400799.60.25160.022300.0220.0440098.60.25320.022470.0220.0441898.70.25070.022130.0220.0439899.30.25040.022130.0260.0471996.40.25050.022160.0260.0475197.50.25160.022330.0260.0473496.27.5样品含量测定按照7.3.2测定含量。结果见表12。表12含量测定结果表香菇样品号来源粗多糖含量（%）样1浙江产，厚菇，一级8.6样2浙江产，厚菇，二级8.0样3浙江产，花菇，一级12.0样4浙江产，薄菇，一级7.5样5浙江产，薄菇，二级7.0样6福建古田产，花菇，特级12.0样7福建古田产，厚菇，一级6.4样8四川青川产，花菇，一级12.4样9四川青川产，厚菇，二级14.2样10浙江产，薄菇，等外6.2表12（续）样11安徽厚菇一级9.6样12湖北花菇特级14.3样13陕西厚菇一级8.7结果表明：13批香菇药材按干燥品计算,平均含量为9.76%，考虑到药材的来源及质量差异，以及药材生产储藏等因素的影响，在平均值的基础上下调至80%，限度确定为：不得少于7.8%。由于本方法所测为水溶性多糖，故限量标准低于GH/T1013-1998《中华全国供销合作总社行业标准香菇》规定的总糖含量。8贮存和保质期8.1贮存取自制香菇（主产地药材），批号：23040801，按照《中华人民共和国兽药典》一部原料药物与制剂稳定性试验指导原则（附录9001）执行，进行稳定性研究影响因素试验，包括高温、高湿及强光照射试验。结果见表13。表13样品稳定性试验影响因素试验结果表影响因素时间（天）性状吸湿性（%）粗多糖变化率（%）//0浅褐色00.00高温5深褐色减重3.810.2110深肉桂色减重4.350.16高湿（75%）5浅褐色增重23.290.2810浅褐色增重25.620.18强光5深褐色减重1.340.3110深肉桂色减重1.480.28结果表明：本品吸潮，同时在高温及强光照射下，性状易发生改变。因此本品应密封贮存在阴凉、干燥处。8.2保质期各企业自行规定。

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1、技术要求1.1提取设备规定了兽用银黄二陈合剂绿色提取生产的提取设备的技术要求。根据收集的国内外信息及团标小组成员实际提取设备情况，确定8条提取设备的技术要求。这是原则性规定，是实现绿色提取的基础。1.1.1提取设备由提取罐体、供料系统、过滤系统、冷却降温系统、自控系统、药渣处理系统组成。1.1.2提取罐体及输料管道材质应为不锈钢材质，质量符合GB/T24511和GB/T4237的规定。1.1.3提取罐体及输料管道焊接焊缝应光滑饱满，无明显咬边，不得有凹陷。罐体内壁光滑，表面做抛光处理，其粗糙度Ra不大于0.8μm。1.1.4供料系统应具备在线流加功能，实现各种液体原辅料的流量实时控制。供料系统管道走向布置合理，管件焊接应光滑。1.1.5过滤系统应采用连续式过滤设备。1.1.6冷却降温系统应采用高效热换设备，热换系数不低于4000，冷却系统变频恒压控制，冷却塔风扇自动化控制。1.1.7自控系统应能实现设备及工艺流程全自动化为主，人工操作为辅。1.1.8药渣处理系统应具备挤渣功能，并与过滤系统连接。1.2工艺控制规定了兽用银黄二陈合剂绿色提取生产的工艺控制的技术要求。根据收集的国内外信息及团标小组成员试生产的实际提取工艺情况，确定3条提取工艺的技术要求。1.2.1根据工艺验证数据建立提取工艺自动控制数字模型，减少人为干预。1.2.2采用回流提取法，减少水的消耗量。1.2.3建立提取药渣、废水的处理措施，以满足国家相关标准规定。1.3消耗指标规定了兽用银黄二陈合剂绿色提取技术在消耗指标的关键项目以及权重，通过关键指标界定绿色技术。表1消耗指标项目指标分值消耗指标综合能耗，tce/1000L≤1025水消耗量，t/1000L≤2151.3.1综合能耗分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，每生产1000L提取液所需要电量、蒸汽，按GB/T2589的规定折算成标煤，以吨标准煤（tce）计。结果见表2。表2三批兽用银黄二陈合剂提取工序综合能耗批号电消耗（kW·h/1000L）蒸汽消耗（t/1000L）饱和蒸汽压力（MPa）综合能耗（tce/1000L）2307020145097.790.49.192307060145097.840.49.1923070801445100.050.49.40在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的综合能耗平均值为9.3tce/1000L，考虑工厂间检测误差等因素，综合能耗标准在平均值的基础上上调至110%左右，定为综合能耗≤10tce/1000L。使用原工艺、原设备时综合能耗约为17tce/1000L，现在综合能耗比之前节约41.2%，最终确定综合能耗不超过10tce/1000L即为达到绿色指标的要求。1.3.2水消耗量分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，每生产1000L提取液所需要消耗水量，以吨（t）计。结果见表3。表3三批兽用银黄二陈合剂提取工序水消耗量批号水消耗量（t/1000L）230702012.0230706011.8230708011.9在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的水消耗量平均值为1.9t/1000L，考虑工厂间检测误差等因素，水消耗量标准在平均值的基础上上调至110%左右，定为水消耗量≤2t/1000L。使用原工艺、原设备时水消耗量约为3t/1000L，现在水消耗量比之前节约33.3%，最终确定水消耗量不超过2t/1000L即为达到绿色指标的要求。1.4产出指标规定了兽用银黄二陈合剂绿色提取技术在产出指标的关键项目以及权重，通过关键指标界定绿色技术。表4产出指标项目指标分值产出指标单罐批量容积率，%≥6010黄芩苷转移率，%≥3515绿原酸转移率，%≥40151.4.1单罐批量容积率分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，单罐提取液批量与提取罐总容积的比值。结果见表5。表5三批兽用银黄二陈合剂提取工序单罐批量容积率批号单罐提取液批量（L）提取罐总体积(L)单罐批量容积率（%）230702011900300063.33230706011980300066.00230708011800300060.00在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的单罐批量容积率平均值为63.1%，考虑工厂间检测误差等因素，单罐批量容积率标准在平均值的基础上下调至95%左右，定为单罐批量容积率≥60%。使用原工艺、原设备时单罐批量容积率约为55%，现在单罐批量容积率比之前增加9.1%，最终确定单罐批量容积率不低于60%即为达到绿色指标的要求。1.4.2黄芩苷转移率分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，黄芩饮片中黄芩苷的量与转移至提取液中黄芩苷的量的比值。结果见表6。表6三批兽用银黄二陈合剂提取工序黄芩苷转移率批号提取液黄芩苷浓度（mg/L）提取液总体积(L)湿品黄芩饮片黄芩苷浓度（mg/kg）湿品黄芩饮片投料量（kg）黄芩苷转移率（%）2307020112201900957186040.3623070601117019801039606037.142307080112801800985616038.96在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的黄芩苷转移率平均值为38.8%，考虑工厂间检测误差等因素，黄芩苷转移率标准在平均值的基础上下调至90%左右，定为黄芩苷转移率≥35%。使用原工艺、原设备时黄芩苷转移率约为31%，现在黄芩苷转移率比之前增加12.9%，最终确定黄芩苷转移率不低于35%即为达到绿色指标的要求。1.4.3绿原酸转移率分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，金银花饮片中绿原酸的量与转移至提取液中绿原酸的量的比值。结果见表7。表7三批兽用银黄二陈合剂提取工序绿原酸转移率批号提取液绿原酸浓度（mg/L）提取液总体积(L)湿品金银花饮片绿原酸浓度（mg/kg）湿品金银花饮片投料量（kg）绿原酸转移率（%）230702012101900141006047.16230706012021980137906048.34230708012201800139856047.19在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的绿原酸转移率平均值为47.6%，考虑工厂间检测误差等因素，绿原酸转移率标准在平均值的基础上下调至90%左右，定为绿原酸转移率≥40%。使用原工艺、原设备时绿原酸转移率约为35%，现在绿原酸转移率比之前增加14.3%，最终确定绿原酸转移率不低于40%即为达到绿色指标的要求。1.5排放指标规定了兽用银黄二陈合剂绿色提取技术在排放指标的关键项目以及权重，通过关键指标界定绿色技术。表8排放指标项目指标分值排放指标废水排放量，t/1000L≤0.910药渣量，t/1000L≤0.35101.5.1废水排放量分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，每生产1000L提取液所排放的废水量，以吨（t）计。结果见表9。表9三批兽用银黄二陈合剂提取工序废水排放量批号废水排放量（t/1000L）230702010.88230706010.73230708010.91在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的废水排放量平均值为0.8t/1000L，考虑工厂间检测误差等因素，废水排放量标准在平均值的基础上上调至110%左右，定为废水排放量≤0.9t/1000L。使用原工艺、原设备时废水排放量约为1.4t/1000L，现在废水排放量比之前减少35.7%，最终确定废水排放量不超过0.9t/1000L即为达到绿色指标的要求。1.5.2药渣量分别统计三批兽用银黄二陈合剂提取工序，每生产1000L提取液所产生的药渣量，以吨（t）计。结果见表10。表10三批兽用银黄二陈合剂提取工序药渣量批号药渣量（t/1000L）230702010.280230706010.320230708010.350在满足提取设备和工艺控制的基本要求下，三批样品提取工序的药渣量平均值为0.32t/1000L，考虑工厂间检测误差等因素，药渣量标准在平均值的基础上上调至110%左右，定为药渣量≤0.35t/1000L。使用原工艺、原设备时药渣量约为0.50t/1000L，现在药渣量比之前减少30.0%，最终确定药渣量不超过0.35t/1000L即为达到绿色指标的要求。1.6绿色指标标准综合能耗、水消耗量、单罐批量容积率、黄芩苷转移率、绿原酸转移率、废水排放量、药渣量等各项指标均比使用原工艺、原设备时有大幅改进，按照4.3/4.4/4.5指定标准作为绿色生产的评价标准。

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